三大液相品牌常见问题涉及仪器性能、方法开发、日常维护及故障排查等多个方面，以下从核心问题出发，结合用户实际需求进行详细解答，帮助用户高效解决使用中的痛点。
仪器性能与方法开发相关问题
液相色谱仪的性能直接影响分析结果的准确性和稳定性,而方法开发则是实现目标物分离的关键环节，用户常遇到的性能问题包括基线漂移、保留时间重复性差、峰形异常等；方法开发则聚焦于色谱柱选择、流动相优化、梯度程序设计等。
以常见品牌Waters、Agilent、Thermo Fisher为例，其仪器在泵系统、检测器、色谱柱兼容性等方面各有特点，Waters的ACQUITY系列泵采用双活塞设计，流速精度高，适合复杂样品分析；Agilent 1260 Infinity II的二元泵梯度混合重复性好，常规方法开发效率高；Thermo Fisher Vanquish系列则凭借智能化软件，可自动优化梯度程序，降低方法开发难度。
常见问题及解决方案：
- 基线漂移：通常由流动相比例波动、检测器池污染或系统漏液引起，需检查流动相脱气是否充分（推荐在线脱气机），清洗检测器池（用纯甲醇或异丙醇冲洗），并排查管路连接处是否密封。
- 保留时间重复性差：可能因柱温波动、流动相比例变化或样品前处理不当导致，建议使用柱温箱控温（±0.1℃），确保流动相混合均匀（如使用低死体积混合器），并规范样品过滤（0.22 μm滤膜）和进样量一致性。
- 峰形拖尾或分叉：多与色谱柱污染、样品溶剂与流动相不匹配或色谱柱选择不当有关，可通过反冲色谱柱、使用强溶剂（如乙腈）冲洗，或调整流动相pH值（如酸性样品用磷酸盐缓冲液）改善；若问题持续，需更换色谱柱（如C18柱适用于大部分小分子化合物）。
日常维护与故障排查
液相色谱仪的定期维护是保障仪器寿命和稳定运行的基础,而快速故障排查则能减少停机时间，用户需重点关注泵、进样器、检测器等核心部件的维护周期及异常处理。
维护周期与操作要点：
| 部件 | 维护周期 | 操作要点 |
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| 泵系统 | 每月1次 | 更换泵密封垫（压力异常时），冲洗泵头（用纯水-甲醇-纯水），排除气泡 |
| 进样器 | 每周1次 | 清洗进样针（用异丙醇超声），更换转子密封圈（漏液时），检查定量环准确性 |
| 色谱柱 | 每次分析后 | 用保存溶剂（如乙腈:水=50:50）平衡，避免长时间保存在纯水或缓冲液中 |
| 检测器 | 每季度1次 | 清洗流通池（用棉签蘸取甲醇轻擦），检查光源能量（如DAD检测器需校准波长） |
典型故障及处理：
- 压力过高：管路堵塞（过滤器或色谱柱入口污染）或流动相黏度过大，可拆卸过滤器超声清洗，或降低流动相比例（如减少乙腈含量，增加水相）。
- 检测器无信号：光源故障（如氘灯寿命到期）或检测器参数设置错误，需检查光源是否点亮，确认波长、流速等参数是否与方法一致。
耗材选择与成本控制
耗材（如色谱柱、流动相、滤膜等）的成本占液相色谱运行费用的较大比例，合理选择耗材可降低实验成本，用户常困惑于色谱柱品牌兼容性、流动相试剂纯度要求等问题。
耗材选择建议：
- 色谱柱：优先选择原厂色谱柱（如Waters XBridge、Agilent ZORBAX、Thermo Fisher Acclaim），确保与仪器系统的兼容性；若需替代，需注意填料类型（C18、CN、NH2等）、粒径（3 μm、5 μm）和柱尺寸（4.6×150 mm、2.1×100 mm）的一致性。
- 流动相：HPLC级试剂（纯度≥99.9%）是基础，避免使用普通级试剂（含杂质导致基噪声高）；缓冲盐需用优级纯，并现配现用（如磷酸盐缓冲液易滋生细菌）。
- 滤膜：样品和流动相均需过滤（0.22 μm），尼龙膜适用于水相和有机相，PTFE膜耐强酸强碱，避免颗粒物堵塞管路。
相关问答FAQs
Q1：如何判断色谱柱是否需要更换？
A：当出现以下情况时需考虑更换色谱柱：①压力持续升高且无法通过冲洗恢复（表明填料塌陷或堵塞）；②分离度显著下降（如理论塔板数<5000）；③峰形严重拖尾或分叉，且排除流动相和样品因素后仍无改善，一般色谱柱使用寿命为500-1000次进样，具体取决于样品复杂度和维护情况。
Q2：液相分析中，保留时间突然提前或延后的可能原因及解决方法？
A：保留时间变化多与色谱柱状态、流动相或系统相关。①提前：可能是流动相比例变化（如乙腈比例升高）、柱温升高或色谱柱老化（填料流失导致保留能力下降），需重新校准流动相比例，检查柱温箱设置，或用强溶剂冲洗色谱柱；②延后：常因流动相比例降低（如水相比例升高）、样品溶剂极性过强（如直接进水样）或色谱柱污染（如强保留物质吸附），需调整流动相比例，确保样品溶剂与初始流动相相容，并用95%甲醇冲洗色谱柱去除污染物。
